基于10x Genomics最新Chromium系统,利用油包水的微反应体系,通过序列标签区别群体中的不同细胞和转录本,获得大量单细胞的快速高效标记、测序和分析,获得单细胞水平的基因表达谱和差异情况,并通过对复杂细胞群体进行深入细致分析,绘制大规模单细胞表达图谱,可实现数千甚至数万个单细胞群体分析,解决常规scRNA-seq方法在通量或扩展性方面存在的不足,为单细胞研究开拓新的思路。
自动化程度高,周期短,1天内可完成从细胞悬液到cDNA文库构建等所有测序前工作。单个细胞成本低于其他方法。
结合转录比对数据和标示细胞的barcode信息,能得到单细胞的转录组图谱,
基于基因表达将细胞分类,定义新的细胞,并将细胞进行聚类、差异基因筛选、差异基因功能分析等。
数据结果统计
tSNE分析结果
表达基因聚类图
小鼠的脾脏、肝脏、心脏、肺脏、脑组织、肿瘤组织;人肿瘤组织、皮肤组织、神经组织 等。
需要综合考虑癌组织的形状、面积等,注意不要混入坏死部分和未癌变的正常组织,肿瘤细胞数量较多的组织,材料采集大小约为1cm3(0.5-1.0克)。间质较多的组织,材料采集大小约为3cm3(1.0-3.0克)。微小样本应保证有效癌变组织大于0.3克。
1、基于 smartseq2的全长mRNA测序, 测序序列比对后能覆盖mRNA全长,不但能够分析基因表达,还能深入分析可变剪切、基因突变等信息。通量低、成本高,适用于样品数量不多的情况。 smartseq2主要实验步骤:单细胞裂解释放RNA——反转录——扩增——纯化——质检——DNA片段化——构建测序文库——测序——生信分析 ;
2、极客基因高通量multiplexed(多标签)单细胞转录组测序, 能够同时处理上百个细胞,研究大量单细胞样品间的基因表达差异,进行细胞分群。通量提高、成本降低。非全长mRNA,不能看可变剪切等信息。 主要实验步骤:单细胞裂解释放RNA——反转录——扩增——pooling、纯化——质检——DNA片段化——构建测序文库——测序——生信分析 ;
3、10X单细胞转录组测序, 同时测一个组织中上万个细胞的mRNA,分析基因差异表达、细胞分群。检测到的基因数量较其它方法少。通量高,成本低。