DNA甲基化是重要的表观遗传学标记信息,与基因表达、表型性状密切相关,一直是表观遗传的研究热点。
Single cell Reduced Representation Bisulfite Sequencing(scRRBS)是一种准确、高效、经济的DNA甲基化研究方法,通过特定酶切富集出全基因组内启动子及CpG岛区域,并进行Bisulfite测序,实现对DNA甲基化情况高分辨率观测。此方法可获得一部分具有重要信息的CpG位点,包括70%以上的启动子区域和80%以上的甲基化岛。
单细胞限定性代表区域甲基化(scRRBS)作为一种高性价比的甲基化研究方法,在基础研究和大规模临床样本的研究中具有广泛的应用前景。
与bulk样本RRBS数据CpG位点富集率相比,合并后的单个小鼠胚胎干细胞RRBS数据富集比例。
甲基化聚类热图
Guo H, et al. Single-cell methylome landscapes of mouse embryonic stem cells and early embryos analyzed using reduced representation bisulfitesequencing. Genome Res. 2013. 23:2126-2135.
单细胞限定性代表区域甲基化(scRRBS),这是种联合酶切的方法,会更多富集出CpG岛区域,主要是检测基因的promoter区域甲基化状态。
单细胞全基因组亚硫酸氢盐测序(scWGBS),单细胞的WGBS是对细胞进行裂解消化包裹DNA的蛋白之后,将DNA用亚硫酸盐处理,之后用随机引物进行若干轮的线性扩增,这样得到的区域在基因组上就是随机的,然后再进行指数扩增,这样测序够深的话就可以得到全基因组的信息。