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单细胞全外显子测序

产品介绍

     在单细胞水平用特制的探针将全基因组外显子组/目标区域DNA序列捕获并富集后进行高通量测序的基因组分析。极客基因采用优化的MDA技术极大的提高了基因组中外显子区域的研究效率。外显子测序相对于基因组重测序成本较低，对研究已知基因的SNP、Indel等具有较大的优势。单细胞外显子&目标区域测序可用于识别和研究与疾病、细胞分化相关的编码区域内的结构变异。结合大量的公共数据库提供的外显子数据，有利于更好地解释所得变异结构之间的关联和致病机理。

技术流程

部分结果展示


G1/0期的9个单细胞用单细胞外显子进行测序。结果显示，所有的单细胞均表现出非常相似的覆盖深度分布，

无论来自G1/0还是G2/M期，这对于后续的分析非常重要。


Leung et al. SNES: single nucleus exome sequencing. Genome Biology(2015) 16:55


送样要求

一、
分离的单细胞放入公司提供的裂解液中，使用干净的无核酸酶的200µlPCR管,每管裂解液用量为5µl，放入细胞时带入缓冲液体积不要超过1µl。
二、
每种细胞建议3-5个细胞做重复。
三、
单细胞放入裂解液后，-80℃保存，干冰运输。运输的时候要将管子做好包装，放入干冰中，以防运输过程中管子损坏。
四、
裂解液-80℃保存，避免反复冻融。
五、
操作过程尽量保持低温环境，加入单细胞的裂解液尽快放入-80℃保存，最好不要 超过1小时，中间的时间越短越好。
六、
样本一旦放在-80℃或干冰冻存之后，不能反复化冻。

常见问题

外显子组捕获测序中的捕获特异性（capture specificity）及覆盖度（coverage ratio）分别指什么？

外显子组捕获特异性是选择优先关注的编码区的信息，运用目标序列捕获技术将全基因组中的全部外显子序列捕获并进行高通量测序的一种基因组分析技术。而覆盖度是检测到的这个样本的总碱基数的百分比。